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    小鼠白介素35(IL-35)ELISA試劑盒操作步驟

    小鼠IL-35ELISA試劑盒的通用標(biāo)準(zhǔn)操作步驟（基于主流商品化試劑盒整理，適配多數(shù)品牌）如下，實(shí)際操作請(qǐng)結(jié)合對(duì)應(yīng)試劑盒說明書調(diào)整：

    一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

    試劑盒從2-8℃冷藏環(huán)境取出，室溫平衡至少20分鐘，讓所有試劑溫度恢復(fù)至室溫；實(shí)驗(yàn)所需蒸餾水/去離子水、酶標(biāo)儀提前備好。

    稀釋濃縮洗滌液：按說明書比例稀釋（20倍濃縮液按1:19加蒸餾水，30倍濃縮液按1:29加蒸餾水），混勻備用。

    標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶：凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入對(duì)應(yīng)體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，蓋好后室溫靜置10分鐘，反復(fù)顛倒搓動(dòng)助溶，再按說明書進(jìn)行倍比稀釋，制備梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

    二、加樣與孵育

    取出酶標(biāo)包被板，設(shè)置?空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔?，空白孔不加樣品和酶標(biāo)試劑，其余步驟操作相同。

    標(biāo)準(zhǔn)品孔：每孔加入對(duì)應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。

    待測(cè)樣本孔：先加入樣品稀釋液40μL，再加入待測(cè)樣本10μL（最終稀釋度為5倍），加樣時(shí)將樣品加于孔底，避免觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

    用封板膜封板，置于37℃恒溫箱/水浴鍋溫育60分鐘。

    三、洗滌

    揭掉封板膜，棄去孔內(nèi)液體并甩干。

    每孔加滿稀釋后的洗滌液，靜置1分鐘后棄去，重復(fù)此操作洗滌5次，最后在吸水紙上充分拍干孔內(nèi)殘留液體。

    四、加酶與顯色

    除空白孔外，每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，重新封板后37℃溫育60分鐘（部分簡(jiǎn)化試劑盒此處為30分鐘，以說明書為準(zhǔn)）。

    重復(fù)洗滌步驟5次，充分拍干。

    每孔先加入顯色劑A50μL，再加入顯色劑B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。

    五、終止與讀數(shù)

    孵育完成后，每孔加入終止液50μL，終止反應(yīng)。

    加入終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定每孔的吸光度（OD值）。

    六、結(jié)果計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出對(duì)應(yīng)的濃度，再乘以樣本的稀釋倍數(shù)，得到最終樣本中IL-35的實(shí)際濃度。

    注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

    本生產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯(lián)管，單管，96孔板，384孔板，封板膜，輔助器等)，ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過濾器及實(shí)驗(yàn)室常用耗材。品種類超過萬種，廣泛應(yīng)用于科研院校、中心實(shí)驗(yàn)室、分子生物學(xué)等科研域。